病毒采样管怎样使用?

采样管内病毒保存液介绍

采样管内病毒保存液介绍

一次性病毒采样管是常用的病毒采样套管,由棉签和病毒保存液组成,与后续PCR仪器相结合可以快速检测病毒性疾病。

但是,并不是,每个样品采集处都能进行PCR检测,因此需要对采集到的病毒棉签样品放在病毒保存液里面进行保存运输,于是一次性病毒采样管应运而生。

病毒是一种非细胞生命形态,它由一种核酸分子与蛋白质构成或仅由蛋白质构成,个体微小、结构简单,只含一种核酸(DNA或RNA)。由于没有细胞结构,病毒自身不能复制,而是将基因侵入宿主细胞内,借助后者的复制系统复制新的病毒。常见的流行传染病通常是RNA病毒,如流感病毒、艾滋病毒、甲流病毒等。病毒样本采集后,为了维持病毒样本的活性、延长样本中病毒存活时间,会将采样棉签放入保存液中保存、运输。

病毒保存液具有很多功能,也分为两种,一种是灭活型病毒保存液,另一种是非灭活型病毒保存液

灭活型病毒保存液可以分为异硫氰酸胍类和改良的灭活型病毒保存液。

异硫氰酸胍类的灭活型病毒保存液,可以减少二次感染,实现安全运输。但是异硫氰酸胍是高浓度的,运输和采样过程容易结晶,采样或者后期实验可能需要溶解,麻烦。并且异硫氰酸胍是高浓度的,需要原料多,成本高,性价比低。

改良的灭活型病毒保存液主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液,里面添加有高浓度的裂解盐,能够迅速高效地使待测样本利的病毒蛋白裂解失活,可以有效防止操作员二次感染,同时又含有Rnase酶抑制剂,可以快速灭活包括DNase和RNase在内的各种酶,保护病毒核酸不被降解,杜绝假阴性。含有特殊的核酸保护剂和稳定剂,可以使释放出来的病毒RNA在常温下4天内无明显的降解,为采集和运输争取时间。从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测,以此判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否感染病毒。改良的灭活型病毒保存液能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样品保存以及运输的成本。

灭活型病毒保存液的优点:

(1)内含高效病毒裂解液,采样后即刻灭活病毒,有效防止二次感染风险。

(2)内含核酸Rnase酶抑制剂,更大化程度保护病毒核酸稳定不被降解,大幅提高核酸提取效率。

(3)产品采样前可常温保存12个月,采样后样本可常温保存一周,密闭性好,方便保存运输,节省运输成本。

(4)灭活型病毒保存液可以快速对呼吸道病原体进行灭活,使样品失去感染性。已灭活的样品可配套多种病毒DNA/RNA提取试剂盒使用,快速提取核酸,同时配合呼吸道病原体PCR检测试剂盒实现快速检测,特异性灵敏度均不受影响。

除上面说的灭活型病毒保存液外,还有非灭活型病毒保存液,非灭活型病毒保存液在Hanks液基础上,增加了庆大霉素,真菌抗生素,BSA,冷冻保护剂、生物缓冲剂及氨基酸等成分。

非灭活型保存液的优点:

(1)多种抗生素联合,具有抗细菌和抗真菌的作用;

(2)牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性;

(3)Hanks缓冲液构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和感染稳定性。

非灭活的病毒保存液通常用于临床流感、禽流感(如H7N9)、手足口病、麻疹等病毒标本及支原体、脲原体、衣原体等活标本的采集及运送。

华晨阳科技自2008年以来一直致力于核酸检测、分子诊断、医学检验、病毒检测试剂等产品研发、生产和销售。华晨阳科技的一次性病毒采样管、一次性采样拭子等产品在国内外都广受好评!

 

病毒采样管怎样使用?

细说新冠病毒的核酸检测法

细说新冠病毒的核酸检测法

新型冠状病毒的检测方法主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测几种方法。由于抗原检测检测检出率较低,目前新冠检测主要集中在抗体和核酸检测。核酸检测目前是新型冠状病毒检测的“标准”,具有早期诊断、灵敏度和特异性高.等特点;但抗体检测操作便捷、检测迅速,可作为核酸诊断的补充手段,但由于抗体检测“假阳性”和“假阴性”的局限性,不适用于复工复产复学等广大人群的筛查,也不适用于低流行地区的流行病学调查。

检测原理:

基本上所有生物都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),除了朊病毒外。而新型冠状病毒属于Beta冠状病毒属,该病毒是蛋白包裹的单链正链RNA病毒,寄生和感染高等动物(包括人)。病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其他病原体的标志物。

新型冠状病毒出现后,我国科学家已经成功发现了新型冠状病毒中的特异性核酸序列。如疑似患者样本中能检测到新冠病毒的特异性核酸序列,则认为该患者可能被新型冠状病毒所感染。

新型冠状病毒常用的核酸诊断方法有两种:病毒核酸特异基因检测和病毒基因组测序。最常见的检测新冠病毒特异性核酸序列的方法是荧光定量PCR(聚合酶链式反应)。由于新型冠状病毒是RNA病毒,试剂盒检测基本都采用反转录加实时聚合酶链式反应法(RT-PCR),扩增病原体的核酸(RNA),同时通过荧光探针实时检测扩增产物。

在PCR反应体系中,包含一对特异性引物以及一个Taqman探针,该探针为一段特异性寡核苷酸序列,两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。

探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;如反应体系存在靶序列,PCR反应时探针与模板结合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解,报告基团与淬灭基团分离,发出荧光。每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(CT值)与病毒核酸浓度有关,病毒核酸浓度越高,CT值越小。不同的生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

由于每个RT-PCR反应需要2个小时左右才出结果,因此,试剂盒在开发是一般都针对病毒序列中高度保守的2~3个序列。比如编码replicase(复制酶)或者necleocapsid(核蛋白衣,核鞘)的核酸序列设计引物,但是各个方法用的序列都不完全相同。一些方法使用multiplex,也就是把多个目标序列在统一反应中扩增;另一些采用分布,先用一个目标序列筛查,阳性后再用另一个序列确认,这样可以有效缩短整个流程时间,加快检测速度。另外RNA病毒变异很快,用多个保守目标序列可以防止病毒变异造成的假阴性。

目前批准产品均基于新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b(open reading frame 1ab,ORF1ab)、包膜蛋白(Envelope protein,E)和核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)进行选择。不同产品的检测原理基本一致,但是其引物、探针设计存在不同、有单靶区段(ORF1ab)、双靶区段(ORF1ab、N蛋白)、三靶区段(ORF1ab、N蛋白和E蛋白)的检测和判读差别。一般检测位于病毒ORF1ab和N基因上的两个靶标,同一份标本满足双靶标阳性或重复检测为单靶标阳性或两种标本同时满足单靶标才能确认病毒核酸阳性。

检测流程:

检测程序需要经过5个步骤,取样、留样、保存、核酸提取、上机检测。首先根据试剂盒说明书进行样本采集,样本类型包括咽拭子鼻拭子、痰液等。获得患者样本后,需尽快进行检测,如无法立即检测需要进行低温封装,并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后,对样本进行核酸提取,核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。最后是荧光PCR核酸检测,也就是上机器检测。将提取物进行荧光PCR扩增反应,需要70~80分钟。

 

核酸病毒采样管的注意事项

核酸病毒采样管的注意事项

核酸病毒采样管的注意事项

(1)产品过期、包装破损或者是漏液不得使用,请尽快联系厂商或者是经销商

(2)病毒采样管不可以直接接触到被采样者的采样部位,禁止用来泡浸拭子后对被采样者进行采样

(3)病毒采样管仅用于病毒类样本的采样,禁止用于细菌样本的采样,采样液本身所含抗生素对细菌有抑制作用。

(4)采集病毒样本应严格按照采样要求和流程进行,做到采样部位准确,采样力度均衡适合,否则会影响到病毒分离阳性率。

(5)使用病毒采样管采样应尽快送检,采集后可置常温(5~35摄氏度)保存短期放置。如需长期放置应置于-80摄氏度以下的低温条件。(注意:H1N1流感病毒颗粒对于-20摄氏度比较敏感,需要低于-20摄氏度进行保存,如采样后不立即送检或者是低温保存,会影响病毒后期的分离阳性率。)

深圳市华晨阳科技有限公司,始创于2008年,是一家专业生产一次性医用耗材厂家。公司及研发、生产和销售为一体。产品涉及医疗、卫生、防疫、教学等众多领域,主要的产品有:一次性使用病毒采样管、一次性采样拭子、咽拭子、鼻拭子、唾液采集器等。

病毒采样管套装的具体概括及采样方法

病毒采样管套装的具体概括及采样方法

一、病毒采样管产品概括:

华晨阳病毒采样管适用于各种流感病毒、禽流感病毒、冠状病毒、手足口病毒、风疹麻疹等病毒样本的核酸提取及后期病毒分离。同时也适用于衣原体、支原体、解脲支原体等标本的采集和运输。通常是在人体的口腔、咽喉、鼻腔、肛门等部位采集标本。

(1)采样管:管身及管盖为聚丙烯材质,高温高压(121摄氏度,15分钟)时不变形,低温(196摄氏度)不变脆。耐静态挤压与动态撞击。底部圆裙边内锥形设计,耐离心与震荡。内装样本保存液,用于样本的保存,杜绝渗漏。

(2)样本保存液:使用病毒裂解液和病毒核酸保存液充分混合。病毒裂解液实现对样本中病毒的灭活,大大降低实验室感染风险。适合病毒保存的核酸保存液配方,确保了病毒保存的高效性、完整性、能在常温下运输和长期保存。内置玻璃珠,方便洗脱,利于病毒等微生物更多释放样本保存液中。

(3)采样拭子:采样拭子为植绒采样头,对细胞、病毒无毒性作用,且不含RNA酶,能最大程度的增加病毒样本的采集和释放量,确保PCR检测结果的准确性。塑料杆为ABS材质,独特的可折断设计,折断过程中没无微小碎屑。本套件采用国际通用的纸塑包装,伽马辐射灭菌。

(4)鼻用拭子:超柔性塑料杆符合人体工程学设计,优化收集的效率,提高患者提取样本的舒适度。尼龙植绒可以强有力的促进液体样品的吸收。样本吸附表面可以更容易更快速地洗脱,从而减少了样本的手工处理。适合于鼻咽及鼻部取样,有独特的折断点设计。

(5)咽拭子:塑料杆符合人体工程学设计,优化收集的效率,提高患者提取样本的舒适度。尼龙植绒能强有力的促进液体样品的吸收。样本吸附表面,可以更容易、更快速地洗脱,从而减少了样本的手工处理。适合于咽喉部取样佩;适合收集气管样本、细胞或液体做DNA测试。

(6)保存液:内含抗菌成分可防止细菌和真菌污染;防止病毒长期冰冻储存;避免样品干燥;可让现时的病菌长期存活;防止样本内其他细菌和真菌生长;稳定病毒和提供最大限度的恢复。

二、采样方法:

(1)打开包装,取出拭子

(2)用拭子采集样本,以下几种方式:

a)鼻拭子:鼻拭子用于收集前鼻甲骨,将干的拭子擦干进入鼻孔放置几秒钟,慢慢地以旋转的动作收回。

b)鼻咽拭子:将干拭子插入鼻孔,放置几秒钟然后慢慢地以旋转的动作收回。

c)咽拭子:请病人张开嘴,用拭子擦靠近扁桃体的喉咙后部。

(3)采完样本后,将拭子垂直的插入含有病毒保存液的试管中,在折断点处折断拭子。

(4)盖紧管盖,正确标记样品包括病人的姓名、时间和日期,然后采集试剂盒立即到实验室检测。

 

 

 

 

核酸检测病毒采样管的类型有哪些?

病毒保存液和细胞保存液的区别

病毒保存液和细胞保存液的区别

病毒保存液:

病毒保存液适用于新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒和新冠病毒等病毒样本采集保存运输工作,是采样管内浸没采样拭子病毒样本一种保护病毒的被检测物质的液体。它可以采集咽拭子、鼻拭子或者是特定的部位组织样本,储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。

通常分为两种,一种是非灭活型,能够保护病毒的蛋白和核酸,另一种是灭活型的,通常是含有灭活病毒的成分,杀死病菌但是可以保护核酸。

我们先来了解一下病毒的结构,其实病毒的结构很简单,一般就只含有一种核酸和蛋白质,核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类,是生命的最基本的物质之一。因此一般检测出特征核算就检测出病毒了。

而病毒属于寄生生物,采样后体外无法存活,如果不能及时检测,就需要放入病毒保存液中。为了保护病毒检测环境的安全性,就需要加入灭活成分来灭活病毒,释放出可以被检测的核酸即可。

(1)灭活型:添加有灭活成分的病毒保存液就是灭活型的病毒保存液,添加灭活成分的主要目的是为了灭活病毒蛋白而释放出核酸,从而通过后续的PCR进行核酸检测,以此判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否感染病毒。灭活型病毒保存液使用上更为安全,操作环境要求也不用那么严格。

(2)非灭活型:除了灭活型的病毒保存液,华晨阳生产的还有非灭活型病毒保存液,不含灭活剂,但是保存的病毒完整性更好,检出率更高,除了核酸检测外还可以用于其他研究。

细胞保存液:

通常所说的细胞保存液是一种通用型的细胞冻存液,可用于冻存人和各种动物细胞株;细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中,及时冻存原始细胞是十分重要的。就拿杂交瘤单克隆抗体的制备过程中,杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候,细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败,如果没有原始细胞的冻存,则因为上述的意外而前功尽弃。

细胞保存液的优点:目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜做保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化是水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤;非程序降温,-80摄氏度低温冰箱冻存长达5年,可以确保冻存细胞安全;可孔板(细胞培养板)冻存,可用于杂交瘤细胞的冻存液,细胞保存液具有稀释作用,能分离出大量包埋在粘液中的有效细胞,使更多有检验价值的细胞被保存下来,提供充足的细胞数量,为检验结果的准确提供保证;同时,处理后的样品经低速离心过滤后能彻底清除样本中的粘液,有效防止粘液对样品检验结果的干扰。细胞保存液经过低速离心后可制成均匀单层的细胞薄片,达到检验要求。

 

 

 

 

病毒采样管怎样使用?

病毒采样管的组成

病毒采样管的组成

病毒采样管

①、保证运输过程中样本不泄漏,符合WHO生物安全规定。管壁及管盖加厚设计(2mm),耐静态挤压与动态撞击。底部锥形设计,耐离心与震荡。瓶盖内侧防漏设计,杜绝渗漏。

②、保证保存过程中样本不泄漏。管身及管盖为聚丙烯材质,高温高压(121℃,15min),无变形低温(-80℃)不变脆。保存过程中没有漏液。

③、保证采样管本身对样本不会有毒害作用。管身及管盖无热原,无DNA、RNA酶,毒性残留测试符合标准,对样本无毒害。

④、采样管可独自站立(底部内锥形带圆裙边)

⑤、管盖不仅有防漏设计还设计一个喇叭直筒口,可以插采样拭子以固定住,方便运输。

采样保存液:

①、华晨阳科技有限公司的保存液是在万级净化车间内的百级操作空间中的全自动定量分装设备生产的,保证生产过程中的全程无菌。最后经过γ射线辐照处理过的产品也避免了由于生产流程控制的原因导致保存液被细菌或者是真菌所污染。

②、我们的病毒保存液是通过大量实验、从基础液、缓冲体系、蛋白稳定剂、冷冻保护剂、氨基酸等营养成分对细胞的影响总结归纳出最适合病毒保存的保存液配方,确保了病毒保存的活性,极大提高了病毒培养的阳性率。

③、我们的病毒保存液选用了很好的抗生素,最大程度抑制住样本的中的真菌和细菌,以免样本受到污染。

采样拭子:

①、我司的拭子头部采用的是聚丙烯、人造纤维材质。拭子的杆部采用的是国家医用级的塑料材质。

②、拭子头部,非棉材质,不含饱和脂肪酸等物质,不会影响PCR实验结果。拭子杆部,非木质或竹质,不含甲醛等物质,对细胞、病毒和人体无毒害作用,不会影响实验的阳性率。拭子整体,γ射线灭菌,非环氧乙烷灭菌,不会影响实验的检验结果。

 

病毒保存液的类别

灭活与非灭活保存液的区别

①、病毒保存液的重要性

核酸检测过程中,病毒保存液的作用特别重要,我们的检验工作没办法在采样结束后就立刻进行检测,从采样完成后到开始检测,可能中间会发生很多事情或者是遇到很多问题,比如异地运输或者是邮寄标本,或者是检测的样品太多而无法按时进行检测等等,这时病毒保存液就起到了相当大的作用。

②、为什么分灭活和非灭活保存液

病毒样品在采集之后,通常样品采集处都不能进行及时进行PCR检测,所以需要对采集的病毒拭子样品进行运输,而病毒本身在体外很快就会裂解掉影响后续检测,所以在保存及运输时,就需要加入病毒保存液,目前主要分为灭活型和非灭活型两种。

对于不同的检测目的,需要使用不同的病毒保存液,目前广泛使用的这两种保存液各有特点。为了满足不同的检测要求,以及不同的病毒检测实验室条件,采样不同的保存液是非常有必要的。

③、灭活型保存液

主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液。能有效阻止操作员二次感染,但是又含有Rnase抑制剂,能保护病毒核酸不被降解,从而使后续能通过NT-PCR进行检测。而且能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样品保存以及运输的成本。

④、非灭活型保存液

主要是以运送培养基为基础改良的病毒维持液型保存液。它能够保持病毒在体外的活性以及抗原和核酸的完整性,含有Hanks液等,保护病毒蛋白质外壳不易分解,较大程度地保持了病毒样本的原始性。这种保存液除了用于核酸提取检测外,还能用于病毒的培养、分离以及抗原的检测等,但是采样后长时间保存需要保持严格低温。

可见根据不同的情况,不同类型的保存液有着各自的优缺点,但是需要注意的是:不管是灭活型还是非灭活型,在采样之前的病毒采样管都必须严格灭活杀菌,保证管内没有其他微生物,致使采样后病毒分解或其它影响造成错误检测。

拭子取样后,如果使用质量欠缺的采集工具或保存液,会影响后续的检测结果甚至造成误诊的假阳性,因此建议选用质量优良的病毒保存液。