病毒保存液对于病毒保存及运输的重要意义

病毒保存液，对于很多小伙伴来时，这是个新奇的词语，殊不知它对于各种病毒的检测具有重要的意义，今年的新冠病毒把人类折磨的够呛，面对着大量的学生要投入正常的生活轨道，很多地方开始集中监测新冠病毒，在其中病毒保存液起到了很重要的作用。

目前对新型冠状病毒的检测方式主要还是对于病毒核酸的检测，而病毒保存液是一种采样管内浸没采样拭子病毒标本的一种保护病毒的被检测物质的液体，它主要适用于新型冠状病毒、手足口病毒、流感病毒等常见的病毒样本采集保存运输工作，可以用来采集咽拭子、鼻拭子或者特定部位的组织样本，储存的样本可以用于后续的核酸检测或者病毒培养等临床实验。

由于病毒属于寄生生物，采样后体外就无法存活了，如果不能及时检测，就需要放入病毒保存液中进行保存，为了保护病毒检测环境的安全和检测人员的安全，灭活病毒保存液其实是比较好的选择。

前面已经说灭活病毒保存液可以使病毒失去活性，失去活性后是怎么来进行检测的呢？我们使用灭活型保存液的目的是裂解核酸，释放核酸然后通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测，通过这种方法来判断样本是否含有病毒特征核酸，即是否感染了病毒。而病毒结构单一，就只含有一种核酸和蛋白质，因此检测出特征核酸就检测出了病毒。通常我们在病毒采样后，样本并不是都能在样本采集处进行运输和保存的，因此我们就需要对采集到的病毒拭子进行运输和保留，不然病毒核酸会很快降解就无法检测到核酸了，所以就需要往采样管里加保存液来让病毒的核酸不要那么快被降解。

华晨阳科技非灭活病毒保存液与市场上其他厂家相比较而言，不仅添加了病毒所必须的Hank’s缓冲液来构建中性环境，还添加了牛血清白蛋白（BSA）作为蛋白质稳定剂，可保护病毒的蛋白质外壳，使其不易分解，获得的DNA/RNA质量好，能得到较快的检测结果，可完成各种病毒检测及分析实验，如PCR、qPCR等，同时节省运输成本。

病毒采样管有哪些方面的要求？

病毒采样管内搭载的都是感染性物质，一部分也是高致病性感染性物质，因此对包装容器的要求非常严格，病毒采样管必须满足三个方面的要求：

①、运输安全：

避免运输过程中样品泄漏，符合世卫组织规定及生物安全规定的采样管。

②、保存的安全性：

避免样品在保存过程中泄漏，符合世卫组织规定及生物安全规定的采样管

③、样品的有效性：

采样管本身保证对样品没有毒害作用

一次性病毒采样管是一种通用的采样产品；

一次性病毒采样管是通用的采样产品，可以迅速灭活病毒，防止气溶胶传播的风险。可用于各种病毒样品、衣原体样品、解脲等离子体样品的样品，在2~8天短期储存和运输，-80℃冰箱或液氮环境中长期储存。在需要长途运输的情况下，为了保证病毒采样管的最佳运用作用，主张冷链（525）的运用

用途：

用于临床流感、禽流感、手足口病、麻疹等病毒标本何支原体、解脲支原体、衣原体等标本的收集和运输，有效灭活病毒。防止气溶胶传播感染的风险。

一次性使用病毒采样管在进行标本采样后，通常标本都不能马上进行PCR检测，往往需要将采样的拭子样品进行运输，而病毒本身在体外很快就会裂解掉，这样就会影响到后续的检测，所以在保存剂运输时，就需要加入病毒保存液，病毒保存液又分为两种，一种是灭活型的，一种是非灭活型的。

为什么需要分为灭活型和非灭活型呢？由于不同的检测目的，需要选择不同的病毒保存液和采样管，而且为了满足这种不同的检测要求和不同的病毒检测实验室的条件，采样不同的病毒，病毒采样管分类是非常有必要的。

那灭活型和非灭活型又有哪些区别呢？或是说它们都能满足哪些采样的需求。

灭活型的病毒保存液主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解灭活型的保存液。采样时内含高浓度的胍盐即可高效灭活病毒，能有效阻止实验操作人员第二次感染，但又含有抑制剂，能保护病毒的核酸不被降解，从而使后续能通过NT-PCR进行检测。而且都能在常温下保存相对较长的时间，节省了病毒样品保存以及运输的成本。

而非灭活型病毒采样管主要是以运送培养基为基础改良的病毒维持型保存液。它能够保持病毒在体外的活性以及抗原核核酸的完整性，保护病毒蛋白质外壳不易分解，较大程度地保持了病毒样本的原始性。这种保存液除了用于核酸提取检测外，还能用于病毒的培养、分离以及抗原的检测等，但是采样后长时间保存需要保持严格低温。

这下你明白为什么病毒采样管需要分成灭活的和非灭活了吧？他们匪类后可以根据不同的情况，不同的需求去选择不同类型的病毒保存液。但是需要注意的是：不管是灭活型还是非灭活型的，在采样之前的病毒采样管都必须严格灭活杀菌，保证管内没有其他微生物，致使采样后病毒分解或其他影响造成错误检测。拭子采样后，如果使用质量欠缺的采样拭子或者是病毒采样管，可能后续的检测结果会出现假阳性，因此一定要选择具有专业资质厂家生产的病毒采样管。深圳市华晨阳科技有限公司，作为一家已有10多年经验的检验标本生产厂家，具有完善的品质管控体系和万级标准的洁净车间，确保病毒采样管高品质的生产，做病毒采样管我们是专业的，值得您的信赖！

一次性病毒采样管是怎么进行样品采集的？

根据《新冠肺炎患者标本采样技术专家共识》，鼻拭子和咽拭子标本的采集方法具体如下：

鼻咽拭子采样：

①、患者头向后倾斜约70度角，不动。

②、用采样拭子推算从耳根到鼻孔的距离，

③、从鼻孔的垂直面部方向插入，深度距离至少要达到从耳垂部到鼻尖的长度的一半。抵抗后必须马上到达鼻咽，停留几秒钟以吸入分泌物（一半要求15~30秒），使拭子旋转3~5次。

④、最好轻轻旋转拭子取出，把拭子头放进装有保存液的采样管或含有RNA酶抑制剂的细胞保存液中。

⑤、前端折断无菌拭子杆，扔掉尾部，拧紧管盖，放进生物安全袋。

口咽拭子采样：

①、指示患者用生理盐水或清水漱口

②、将拭子从纸塑袋中轻轻取出；

③、让患者坐下，头向后仰，张大嘴，并发出“啊~”音

④、用压舌板固定住舌头，越过舌根擦拭咽后壁和扁桃体的隐窝、侧壁等。

⑤、首先用拭子适度强力往返两侧咽扁桃体至少擦拭3次，然后擦拭咽后壁至少3次、3~5次

⑥、取出拭子，不要触碰到舌头、悬锤体、口腔黏膜、唾液等

⑦、将拭子放进含有病毒保存液里，把高出管子的拭子尾部在拭子折断点处折断，并弃去尾部，拧紧管盖，放进生物安全袋里。

病毒样品采集后，通常不能在采样地方进行核酸检测，因此需要输送病毒采样管到实验室进行检测。但是病毒一旦离开宿主就会很快分解掉，这样就会影响后续的检测结果，因此在保存和运输时需要将病毒放进病毒保存液里进行保存，以便后续检查。现在主要分为灭活型和非灭活型两种，为了满足不同的检查要求和不同的病毒检查实验室要求，需要采用不同的保存液。

病毒采样管的采样拭子是直接接触采样部位的，采样头的材质与后续检测密切相关。病毒采样管采样拭子头应使用聚酯（PE）合成纤维或人造纤维制成，不得使用海藻酸钙海绵或者是木质杆拭子（包括竹签杆的），而且拭子的头部不可以是由棉花缠绕而成的，因为棉纤维具有很强的蛋白质吸附能力，所以不容易被洗脱到随后的保存液中；而含有海藻酸钙和木质成分浸入保存液后也会吸收蛋白质，甚至会抑制随后的PCR反应。

那你可能会问了，怎样才能让拭子的检测效果不受抑制呢？

我们可以采用合成纤维来做拭子头，比如PE纤维，聚酯纤维和聚丙烯纤维。

海藻酸钙海绵是被禁止做采样拭子材料的！拭子手柄有破碎型和内置型两种。采样后将拭子放进保存管里，并在折断口处折断拭子尾部并弃去。拧紧管盖，及时送检。

也有一种内置的拭子，就是管帽和拭子是连接在一起的，直接采完样把拭子放进采样管拧紧就好了。

还有如果采样管是比较小的话，尽量用折断点短一点的拭子，以免在折断拭子时液体外溅导致污染的风险。

还有需要厂家注意的是，采样拭子和病毒采样管是要确保采样量和释放量以及不能影响后续检测的，所以不建议使用或添加海藻酸钙，也不建议使用木制或者是竹制的拭子柄。

核酸检测病毒采样管的类型有哪些？

使用核酸检测病毒采样管采集标本后，常规标本无法立即通过PCR进行检测。通常需要将拭子样品与标本一起运输。病毒本身将迅速在体外溶解，并影响后续检测。运输时，必须添加病毒保存液。下面核酸病毒采样管厂家带您了解两种类型：灭活和非灭活。

为了实现不同的检测目的，需要选择不同的病毒采样管。当前广泛使用的两个病毒采样管具有各自的特点。为了满足不同的测试要求和不同的病毒测试实验条件，通常需要对不同的病毒采样管进行采样。

灭活病毒采样管：主要是从核酸提取裂解液改良而来的病毒裂解保存液。采样期间含有高浓度的胍盐可以有效地灭活病毒，可以有效地阻止实验检测员再次感染病毒。而且他可以在室温下保存相对较长的时间，从而节省了病毒样本的保存和运输成本。

非灭活病毒采样管：主要是基于改进的以运输介质为基础的病毒粘附液保存溶液。非灭活的病毒采样管可以在体外维持病毒的活性以及抗原和核酸的完整性，维持病毒的蛋白外壳并且不易分化，并在很大程度上保持病毒样本的独创性。除了核酸提取和检测之外，该存储溶液还可以用于病毒培养，分离和抗原检测。但是，采样后要长期保存，需要严格的低温。

可以看出，需要根据不同的条件选择不同的病毒采样管。但是，应该注意的是，无论是灭活型还是错误的灭活型，采样前都必须对病毒采样管进行严格的灭活和灭菌处理，以确保试管中没有其他微生物，这可能导致病毒分化。采样后的其他或其他影响导致错误检测。拭子采样后，如果使用劣质的采集工具或保存液溶液，将影响后续的检测结果，甚至会导致误诊的假阳性。因此，有必要选择核酸病毒采样管厂家。

华晨阳科技有限公司是专门研发生产病毒采样管厂家，公司有一次性使用病毒采样管、采样拭子、咽拭子、鼻拭子、宫颈拭子等物美价廉的产品。

公司创立以来，凭借着“开拓创新、锐意进取、质量至上、求实创新、诚信守法、合作共赢”的经营理念，为您提供更优质的产品。

一次性病毒采样管的测试方法是怎样的？

一次性病毒采样管的测试方法：

（1）根据采样需求，一次性病毒采样管用采样拭子采集样品

（2）将采样拭子放进采样管里，在断点处折断拭子杆，拧紧一次性病毒采样管盖

（3）一次性病毒采样管标签上注明采样信息

采样管采样的具体操作：口腔拭子

（1）准备一杯清水，喝约50ml的清水充分洗漱口，吐出约10秒钟，重复该步骤2次

（2）漱口后，30分钟内不喝水，不吃东西，不抽烟等

（3）拆下采样管的外包装，在箭头标记处撕开拭子的外包装，取出拭子（手持拭子的距离不到拭子的一半）

（4）将拭子伸进左侧口腔，用刷牙的力度上下擦拭左侧脸颊内壁，一边旋转拭子，尽可能多地刮取口腔细胞，重复该动作30分钟左右。

（5）将拭子放进采样管内，在折断处折断采样杆

（6）将另一个拭子放进右侧口腔，重复步骤（4）的动作以刮取右侧脸颊内壁的口腔细胞

（7）将拭子放进采样管内，在折断处折断采样杆

（8）盖紧采用管的盖子，及时送检

深圳市华晨阳科技有限公司成立于2008年，是一家致力于开发、生产和销售基因采样拭子、病毒采样管、细胞保存液、唾液采集器装置及涂药器等产品的医疗公司。工厂配备了10万级清洁工厂和自己的万级实验室，近年来公司增加了自主研发投入，引进了高新技术人才和技术，同时与国内外多家科学研究医疗机构建立了良好的合作关系。

病毒采样管的基因采集过程

我们都知道病毒采样管也叫病毒保存管，它适用于流感病毒型的病毒的采样和保存，支原体、衣原体、脲原体等的采样。

对于病毒采样管的运用，我们平常比较熟悉的可能是咽拭子采集或者是鼻拭子采集这些，但是今天我们要说的是基因检查的采集。

怎样采集呢？跟咽拭子和鼻拭子又有什么不同呢？

（1）、检查被采集者的名字和测试项目，询问是否有严重的口腔溃疡和支气管炎。如果有是不建议进行采集口腔拭子样品的。

（2）、让被采集者的用水漱口3次，清洁口腔后等待30分钟。在此期间，不能喝水、不能吃东西、不能抽烟、不能吃槟榔和 咀嚼口香糖等。

（3）、等待期间，让被采集者自行打开塑料包装，打开采样盒，介绍基因检查，产品分类说明，检查采集用品是否受损。如果有破损，请更换采集套件。

（4）、在基因检查保存卡、健康信息采集表、2个试管和回收箱中插入条形码，将带条形码的存储卡交给被采集者永久保存，以后查询报告。

（5）、注意事项后，请被采集者帮助填写健康信息采集表，用正楷填写，填写后签名

（6）、基因检查一次使用采样管采样拭子的采集时间。

（7）、将采集到的2个一次性采样管和健康信息包放回样品回收箱内，用泡沫固定住。最后，返回框和外部框中填写名称。

（8）、新鲜采集的标本请及时送检，常温下可保存一个月时间，如不能及时送检，请置于-70摄氏度以下冻存。

细说新冠病毒的核酸检测法

新型冠状病毒的检测方法主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测几种方法。由于抗原检测检测检出率较低，目前新冠检测主要集中在抗体和核酸检测。核酸检测目前是新型冠状病毒检测的“标准”，具有早期诊断、灵敏度和特异性高.等特点;但抗体检测操作便捷、检测迅速，可作为核酸诊断的补充手段，但由于抗体检测“假阳性”和“假阴性”的局限性，不适用于复工复产复学等广大人群的筛查，也不适用于低流行地区的流行病学调查。

检测原理：

基本上所有生物都含有核酸，核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），除了朊病毒外。而新型冠状病毒属于Beta冠状病毒属，该病毒是蛋白包裹的单链正链RNA病毒，寄生和感染高等动物（包括人）。病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其他病原体的标志物。

新型冠状病毒出现后，我国科学家已经成功发现了新型冠状病毒中的特异性核酸序列。如疑似患者样本中能检测到新冠病毒的特异性核酸序列，则认为该患者可能被新型冠状病毒所感染。

新型冠状病毒常用的核酸诊断方法有两种：病毒核酸特异基因检测和病毒基因组测序。最常见的检测新冠病毒特异性核酸序列的方法是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。由于新型冠状病毒是RNA病毒，试剂盒检测基本都采用反转录加实时聚合酶链式反应法（RT-PCR）,扩增病原体的核酸（RNA），同时通过荧光探针实时检测扩增产物。

在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。

探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（CT值）与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，CT值越小。不同的生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

由于每个RT-PCR反应需要2个小时左右才出结果，因此，试剂盒在开发是一般都针对病毒序列中高度保守的2~3个序列。比如编码replicase（复制酶）或者necleocapsid（核蛋白衣，核鞘）的核酸序列设计引物，但是各个方法用的序列都不完全相同。一些方法使用multiplex，也就是把多个目标序列在统一反应中扩增；另一些采用分布，先用一个目标序列筛查，阳性后再用另一个序列确认，这样可以有效缩短整个流程时间，加快检测速度。另外RNA病毒变异很快，用多个保守目标序列可以防止病毒变异造成的假阴性。

目前批准产品均基于新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b（open reading frame 1ab，ORF1ab）、包膜蛋白（Envelope protein,E）和核衣壳蛋白（nucleocapsid protein，N）进行选择。不同产品的检测原理基本一致，但是其引物、探针设计存在不同、有单靶区段（ORF1ab）、双靶区段（ORF1ab、N蛋白）、三靶区段（ORF1ab、N蛋白和E蛋白）的检测和判读差别。一般检测位于病毒ORF1ab和N基因上的两个靶标，同一份标本满足双靶标阳性或重复检测为单靶标阳性或两种标本同时满足单靶标才能确认病毒核酸阳性。

检测流程：

检测程序需要经过5个步骤，取样、留样、保存、核酸提取、上机检测。首先根据试剂盒说明书进行样本采集，样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液等。获得患者样本后，需尽快进行检测，如无法立即检测需要进行低温封装，并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后，对样本进行核酸提取，核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。最后是荧光PCR核酸检测，也就是上机器检测。将提取物进行荧光PCR扩增反应，需要70~80分钟。